Время теста на беременность

ELISA антитела против HCG IgA (HCG-IGA)

Инструкции по использованию этого реагента.

Цель: этот комплект используется для определения содержания анти-HCG-антитела IgA (HCG-IGA) в сыворотке человека, плазме и родственных образцах жидкости.

Экспериментальный принцип:
В этом комплекте используется метод сэндвича с двойным антителом для определения уровня анти-ХКГ-антитела человека (HCG-IGA) в образце. Микропористые пластины покрывали очищенным антителом к ​​антителам против HCG человека IgA (HCG-IGA) для приготовления твердофазных антител. Антитело против HCG IgA (HCG-IGA) добавляли в микроволновые, покрытые MAB, а затем мечали HRP, козьи античеловеческие антитело связываются с образованием антитело-антиген-энзиментного комплекса. После тщательной промывки подложка TMB добавляется для разработки цвета. TMB превращается в синий при катализе фермента HRP и в последний желтый под действием кислоты. Глубина цвета положительно коррелирует с антителом против HCG IgA (HCG-IGA) в образце. Поглощение (значение OD) измеряли с помощью считывателя микропланшетов на длине волны 450 нм, и концентрацию человеческого антитела против HCG IgA (HCG-IGA) в образце рассчитывали по стандартной кривой.

Композиция комплекта:
Композиция комплекта 48 Конфигурация скважины 96 Инструкции по конфигурации.
Один герметичный пакет и один энзим-меченная на покрывающих пластине 1 × 48 1 × 96 2-8 ℃ Сохраненный стандарт: 54PG / мл 0,5 мл × 1 бутылка 0,5 мл × 1 Стандартный разбавитель 1,5 мл × 2-8 ℃ × 1 бутылка 1,5 ML × 1 Бутылка из энзимных реагентов, хранящихся при 2-8 ℃ 3 мл × 1 бутылку 6 мл × 1 бутылки для образца разбавителя при 2-8 ℃ 3 мл × 1 бутылку 6 мл × 1 цветового хранения при 2 -8 ℃ Реагент А. Раствор 3 мл × 1 бутылка 6 мл × 1 бутылка 2-8 ° С. Сталки разработчик B раствор 3 мл × 1 бутылка 6 мл × 1 бутылка 2-8 ° C Бутылка 2- Храните концентрированный промывочный раствор при 8 ℃ (20 мл × 20 раз) × 1 бутылка (20 мл × 30 раз) × 1 бутылка при 2-8 ℃
1. Сыворотка: комнатная температура крови коагуляции естественным путем в течение 10-20 минут, центрифугируется около 20 минут (2000-3000 об / мин). Соберите супернатант осторожно и снова центрифуга, если во время хранения появляется осадок.
2. Плазма: ЭДТА или цитрат натрия следует выбрать в качестве антикоагулянта в соответствии с требованиями образца, смешивается в течение 10-20 минут и центрифугирована в течение примерно 20 минут (2000-3000 об / мин). Соберите супернатант внимательно. Если осадок формируется во время хранения, его следует снова центрифугировать.
3. Моча: собрано в стерильных трубках и центрифугирована в течение примерно 20 минут (2000-3000 об / мин). Соберите супернатант внимательно. Если осадок образуется во время хранения, снова центрифуга снова. Плевральное и асцит, справочная опорная реализация спинномозговой жидкости.
4. Супернатант клеточной культуры: при обнаружении секретируемых компонентов собирайте стерильной трубкой. Центрифуга в течение примерно 20 минут (2000-3000 об / мин). Соберите супернатант внимательно. При обнаружении компонентов внутри клеток разбавьте суспензию клеток PBS (pH7.2-7.4), и концентрация клеток достигнет около 1 миллиона / мл. Благодаря повторному замораживанию и оттаиванию клетки разрушаются, а внутриклеточные компоненты высвобождаются. Центрифуга в течение примерно 20 минут (2000-3000 об / мин). Соберите супернатант внимательно. Если осадок формируется во время хранения, его следует снова центрифугировать.
5. Организуйте образец: после разрезания образца весите его. Добавьте определенное количество PBS, pH7.4. Быстро заморозить и сохранить с жидким азотом для последующего использования. После того, как образец растает, он все еще сохраняет температуру 2-8 ° C. Добавить определенное количество PBS (pH7,4) и гомогенизацию образца с помощью ручного или гомогенизатора. Центрифуга в течение примерно 20 минут (2000-3000 об / мин). Соберите супернатант внимательно. После аликвотирования часть должна быть проверена, а остальное заморожено для будущего использования.
6. Образец должен быть извлечен как можно скорее после сбора. Извлечение следует проводить в соответствии с соответствующей литературой. Эксперимент должен проводиться как можно скорее после извлечения. Если тест не может быть выполнен немедленно, образец может храниться при -20 ℃, но следует избегать повторного замораживания и оттаивания.
7. Образец, содержащий NAN3, не может быть обнаружен, потому что NAN3 ингибирует активность пероксидазы хрена (HRP).
Шаги:
1. Разведение и загрузка стандартных продуктов: установите 10 стандартных скважин на пластину с покрытием фермента, добавьте 100 мкл стандартных продуктов в первом и втором скважине, а затем добавьте стандартные продукты в первом и втором скважине. 50 мкл разбавителя, хорошо перемешайте; Затем возьмите 100 мкл от первой скважины и второй скважины и добавьте их в третью и четвертую скважину соответственно, а затем добавьте 50 мкл стандартного раствора разбавления в третью и четвертую скважину соответственно, хорошо перемешайте, а затем возьмите 50 мкл в третьем и четвертом скважине. и отбросьте его, затем добавьте 50 мкл каждый в пятый и шестой скважины, а затем добавьте 50UL стандартного раствора разбавления в пятый и шестой скважины соответственно и хорошо перемешайте; После перемешивания возьмите 50 мкл из пятого и шестого скважины и добавьте их в седьмые и восьмые скважины соответственно. Затем добавьте 50 мкл стандартного раствора разбавления в седьмые и восьмые скважины соответственно. Возьмите 50 мкл из восьми скважин и добавьте их в девятое и десятое скважины. Затем добавьте 50 мкл стандартного раствора разбавления в девятые и десятые скважины соответственно. После перемешивания возьмите 50 мкл из девятого и десятого скважин и выбросить. (После разведения объем каждой скважины составляет 50 мкл, а концентрации составляют 36pg / мл, 24pg / мл, 12pg / мл, 6pg / мл, 3pg / мл).
2. Добавьте образцы: настройте пустые скважины (пустые управляющие скважины не добавляют образцы и энзимные реагенты, остальные шаги одинаковы), а скважины для образцов, которые будут проверены. Добавьте 40 мкл разбавителя образца в скважину испытательного образца пластины с покрытием фермента, а затем добавьте 10 мкл испытательного образца (конечное разведение образца составляет 5 раз). Добавьте образец и добавьте образец в нижнюю часть скважины микропланшета, постарайтесь не касаться стенки скважины, осторожно встряхните, чтобы смешивать.
3. Инкубация: запечатайте тарелку пленкой герметизации и инкубируйте при 37 ° C в течение 30 минут.
4. Смешающий раствор: разбавление в 30 раз (20 раз 48t) концентрированная промывая жидкость с дистиллированной водой в 30 раз (20 раз 48t), а затем используйте.
5. Мытье: осторожно очистите пленку для герметизации, выбросьте жидкость, высушите, заполните каждую скважину промывшим раствором, дайте ей стоять на 30 секунд и выбросить, повторить 5 раз и высушить.
6. Добавьте фермент: добавьте 50 мкл реагента для ферментов в каждую скважину, кроме пустого скважины.
7. Инкубация: операция такая же, как 3.
8. Мытье: операция такая же, как 5.

9. Развитие цвета: добавьте 50 мкл разработчика A в каждую скважину, а затем добавьте 50 мкл разработчика B, аккуратно перемешайте и отображайте при 37 ℃ в течение 15 минут в темноте.
10. Завершение: добавьте 50 мкл стоп -раствора в каждую лунку, чтобы остановить реакцию (в настоящее время синий цвет превратится в желтый).
11. Определение: измерьте поглощение (значение OD) каждой скважины в последовательности с пустым кондиционером на ноль и длине волны 450 нм. Измерение должно выполняться в течение 15 минут после добавления окончательного решения.
Меры предосторожности:
1. Комплект должен быть уравновешен при комнатной температуре в течение 15-30 минут, прежде чем быть выведенным из охлажденной среды. Если покрытая ферментной этикеткой пластина нераскрыта, полоска должна храниться в герметичном мешке.
2. Кристаллы могут быть осаждены в концентрированной промывшей жидкости, которую можно нагревать и растворить в водяной бане во время разведения, и результаты не будут затронуты во время промывки.
3. Пробоонечник следует использовать на каждом этапе добавления образца, а точность должна регулярно проверять, чтобы избежать ошибок испытаний. Лучше всего контролировать время отбора проб в течение 5 минут. Если есть много образцов, рекомендуется использовать залп пистолет для добавления образцов.

4. Пожалуйста, сделайте стандартную кривую в то же время каждого измерения, лучше всего сделать двойное отверстие. Если содержание вещества, подлежащего тестированию в образце, слишком высокое (значение OD образца больше, чем значение OD первой скважины стандартной скважины), пожалуйста, разбавьте его с определенным множественным (n раз) Образец разбавился, а затем определите его. Несколько (× n × 5).
5. Пленка герметизации ограничена единовременным использованием, чтобы избежать перекрестного загрязнения.
6. Пожалуйста, держите подложку подальше от света.
7. Строго следуйте инструкциям, и результаты теста должны быть определены считывателем микропланшетов.
8. Все образцы, промывка жидкостей и различные отходы должны рассматриваться как инфекционные агенты.
9. Компоненты различных партий этого реагента не должны быть смешаны.
10. Если есть какая -то разница в английском руководстве, английское руководство преобладает.
Расчет:
Принимая концентрацию стандарта в качестве абсцисса и значение OD в качестве ординаты, нарисуйте стандартную кривую на координатной бумаге и найдите соответствующую концентрацию из стандартной кривой в соответствии со значением OD образца; затем умножьте на коэффициент разбавления; Рассчитайте уравнение линейной регрессии стандартной кривой со значением OD, замените значение OD образца в уравнение, вычислите концентрацию образца и умножьте его на коэффициент разбавления, чтобы получить фактическую концентрацию образца.

(Эта картина только для справки)

Производительность комплекта:
1. Коэффициент корреляции R между линейной регрессией образца и ожидаемой концентрацией составляет более 0,990.
2. Партия и одобрение составляют менее 9% и 11% соответственно
Диапазон экзаменов:
1pg / мл -45pg / мл
Условия хранения и период достоверности:
1. Храните комплект: 2-8 ℃.
2. Достоверность: 6 месяцев