Связанный на ферментах иммуноанализ глека-хорионического гонадотропина свиньи (β-HCG)

Подводная β-человеческая гонадотропин (β-HCG), связанный с ферментом,
Название наркотиков:
Общее название: свиная бета-хорионическое гонадотропин (β-ХГЧ) ELISA

Цель использования:
Этот комплект используется для определения β-человеческого хорионного гонадотропина (β-HCG) в сыворотке свиньи, плазмы и родственных образцах жидкости.

Экспериментальный принцип:
В этом комплекте используется метод сэндвича с двойным антителом для определения уровня гонадотропина β-человеческого гонадотропина свиньи (β-HCG) в образце. Микропористые пластины покрывали очищенным свино-человеческим хорионическим гонадотропином (β-HCG) антителом для производства твердофазных антител. Хорионический гонадотропин β-человека (β-HCG), затем в сочетании с меченным HRP антителом, меченным HRP, с образованием антител-антител-антитело-анцимя Добавлен для разработки цвета. TMB превращается в синий при катализе фермента HRP и в последний желтый под действием кислоты. Глубина цвета положительно коррелирует с β-β (β-HCG) человека (β-HCG). Поглощение (значение OD) измеряли с помощью считывателя микропланшетов на длине волны 450 нм, а концентрация голорогонского β-человеческого гонадотропина (β-HCG) в образце рассчитывали по стандартной кривой.

Композиция комплекта:
1 20 раз концентрированный промывочный раствор 30 мл × 1 бутылка 7 Стоп раствор 6 мл × 1 бутылка
2 Энзимная метка реагент 6 мл × 1 бутылка 8 Стандартный (270 мкг / л) 0,5 мл × 1 бутылка
3 Энзимная метка покрытая пластина 12 лунок × 8 полос 9 стандартных разведений 1,5 мл × 1 бутылка
4 Образец разбавителя 6 мл × 1 бутылка 10 Инструкции 1 Копия
5 Разработчик A раствор 6 мл × 1 бутылка 11 2 герметичная пленка
6 Разработчик B Liquid 6 мл × 1 / бутылка 12 запечатанный пакет 1

Требования к образцу:
1. Образцы извлекаются как можно скорее после сбора, а экстракция выполняется в соответствии с соответствующей литературой, и эксперименты должны проводиться как можно скорее после извлечения. Если тест не может быть выполнен немедленно, образец может храниться при -20 ℃, но повторяется замораживание и оттаивание
2. Образцы, содержащие NAN3, не могут быть обнаружены, потому что NAN3 ингибирует активность пероксидазы хрена (HRP).

Шаги:
1. Разведение и загрузка стандартных продуктов: установите 10 стандартных скважин на пластину с покрытием фермента, добавьте 100 мкл стандартных продуктов в первом и втором скважине, а затем добавьте стандартные продукты в первом и втором скважине. 50 мкл разбавителя, хорошо перемешайте; Затем возьмите 100 мкл от первой скважины и второй скважины и добавьте их в третью и четвертую скважину соответственно, а затем добавьте 50 мкл стандартного раствора разбавления в третью и четвертую скважину соответственно, хорошо перемешайте, а затем возьмите 50 мкл в третьем и четвертом скважине. и отбросьте его, затем добавьте 50 мкл каждый в пятый и шестой скважины, а затем добавьте 50UL стандартного раствора разбавления в пятый и шестой скважины соответственно и хорошо перемешайте; После перемешивания возьмите 50 мкл из пятого и шестого скважины и добавьте их в седьмые и восьмые скважины соответственно. Затем добавьте 50 мкл стандартного раствора разбавления в седьмые и восьмые скважины соответственно. Возьмите 50 мкл из восьми скважин и добавьте их в девятое и десятое скважины. Затем добавьте 50 мкл стандартного раствора разбавления в девятые и десятые скважины соответственно. После перемешивания возьмите 50 мкл из девятого и десятого скважин и выбросить. (После разведения объем каждой скважины составляет 50 мкл, а концентрации составляют 180 мкг / л, 120 мкг / л, 60 мкг / л, 30 мкг / л, 15 мкг / л).
2. Добавьте образцы: настройте пустые скважины (пустые управляющие скважины не добавляют образцы и энзимные реагенты, остальные шаги одинаковы), а скважины для образцов, которые будут проверены. Добавьте 40 мкл разбавителя образца в скважину испытательного образца пластины с покрытием фермента, а затем добавьте 10 мкл испытательного образца (конечное разведение образца составляет 5 раз). Добавьте образец и добавьте образец в нижнюю часть скважины микропланшета, постарайтесь не касаться стенки скважины, осторожно встряхните, чтобы смешивать.
3. Инкубация: запечатайте тарелку пленкой герметизации и инкубируйте при 37 ° C в течение 30 минут.
4. Смешающий раствор: разбавьте 20 раз концентрированную промывшую жидкость с дистиллированной водой 20 раз и резерв
5. Мытье: осторожно очистите пленку для герметизации, выбросьте жидкость, высушите, заполните каждую скважину промывшим раствором, дайте ей стоять на 30 секунд и выбросить, повторить 5 раз и высушить.
6. Добавьте фермент: добавьте 50 мкл реагента для ферментов в каждую скважину, кроме пустого скважины.
7. Инкубация: операция такая же, как 3.
8. Мытье: операция такая же, как 5.
9. Развитие цвета: добавьте 50 мкл разработчика A в каждую скважину, а затем добавьте 50 мкл разработчика B, аккуратно перемешайте и развивайте цвет при 37 ℃ в темноте
15 минут.
10. Завершение: добавьте 50 мкл стоп -раствора в каждую лунку, чтобы остановить реакцию (в настоящее время синий цвет превратится в желтый).
11. Определение: измерьте поглощение (значение OD) каждой скважины в последовательности с пустым кондиционером на ноль и длине волны 450 нм. Измерение должно проводиться в течение 15 минут после добавления раствора стоп.

Расчет:
Принимая концентрацию стандарта в качестве абсцисса и значение OD в качестве ординаты, нарисуйте стандартную кривую на координатной бумаге и найдите соответствующую концентрацию из стандартной кривой в соответствии со значением OD образца; умножить коэффициентом разбавления; или используйте концентрацию стандартной, вычислить уравнение линейной регрессии стандартной кривой со значением OD, замените значение OD образца в уравнение, вычислите концентрацию образца и умножьте его на коэффициент разбавления, чтобы получить фактическую концентрацию пример.
Меры предосторожности:
1. Комплект должен быть выведен из охлажденной среды и уравновешен при комнатной температуре в течение 15-30 минут перед использованием. Если после отверстия появляется пластина с покрытием фермента, полоса должна храниться в запечатанном пакете.
2. Кристаллы могут быть осаждены в концентрированной промывшей жидкости, которую можно нагревать и растворить в водяной бане во время разведения, и результаты не будут затронуты во время промывки.
3. Пробоонечник следует использовать на каждом этапе добавления образца, а точность должна регулярно проверять, чтобы избежать ошибок испытаний. Лучше всего контролировать время отбора проб в течение 5 минут. Если есть много образцов, рекомендуется использовать залп пистолет для добавления образцов.
4. Пожалуйста, сделайте стандартную кривую в то же время каждого измерения, лучше всего сделать двойное отверстие. Если содержание вещества, подлежащего тестированию в образце, слишком высокое (значение OD образца больше, чем значение OD первой скважины стандартной скважины), пожалуйста, разбавьте его с определенным множественным (n раз) Образец разбавился, а затем определите его. Несколько (× n × 5).
5. Пленка герметизации ограничена единовременным использованием, чтобы избежать перекрестного загрязнения.
6. Пожалуйста, держите подложку подальше от света.
7. Строго следуйте инструкциям, и результаты теста должны быть определены считывателем микропланшетов.
8. Все образцы, промывка жидкостей и различные отходы должны рассматриваться как инфекционные агенты.
9. Компоненты различных партий этого реагента не должны быть смешаны.
10. Если есть какая -то разница в английском руководстве, английское руководство преобладает.

Диапазон экзаменов:
10 мкг / л -200 мкг / л
Технические характеристики:
96 Условий Хранения / Даты хранения ящиков и срока годности
1. Хранение комплекта :; 2-8 ℃.
2. Достоверность: 6 месяцев